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利用肠激酶加工融合蛋白的方法制备重组人甲状旁腺素(1~34)肽
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牛肠激酶基因工程菌的构建、高密度发酵、纯化及活性鉴定
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经肠激酶切割和纯化,获得了与天然蛋白N-末端相同的hK5重组蛋白。
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在酶切融合蛋白时,除正常切割和非特异性切割以外,发现了牛肠激酶的一个可能的次特异性识别序列。
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对重组肠激酶在大肠杆菌中的高密度发酵表达条件、纯化方法及其生物活性测定进行了研究。
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Characterization of Enterokinase and Its Research Advances in Genetic Engineering
肠激酶特点及其基因工程的研究进展
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Fermentation and Purification of Recombinant Enterokinase by Producing in E.coli
重组肠激酶在大肠杆菌中的发酵与纯化
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经表达条件优化,大量制备重组蛋白,变性条件下进行镍离子亲和层析纯化。对纯化后的重组蛋白进行复性,用肠激酶切割复性蛋白以获得目的多肽。
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胰蛋白酶是以无活性的酶原形式存在于鱼类胰脏中,被肠激酶或有活性的胰蛋白酶自身激活,分子构象发生一定改变后转变为有活性的胰蛋白酶。
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该粗酶经脱盐后在适宜的缓冲体系中21℃温育过夜,显示出较高的自催化切割活性,为进一步进行重组牛肠激酶活性的研究及应用奠定了基础。
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重组肠激酶在甲醇酵母中高效表达的培养条件研究
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酶切后生成多个小分子量片段。定性分析及分离纯化工作仍在继续。
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经金属离子亲和吸附、肠激酶消化以游离vMIPⅡ、阳离子交换层析等步骤纯化目的蛋白。
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SDS-PAGE凝胶电泳发现,转基因油菜油体肠激酶酶切前后蛋白条带发生了明显改变,说明肠激酶可以对纯化的油体进行有效切割。
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Refolding of the Fusion Protein of Recombinant Enterokinase Light Chain rEK_L
融合牛肠激酶轻链EK L包涵体蛋白的复性纯化
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利用肠激酶酶切该重组噬菌体,获得了高滴度的重组噬菌体,证明了模拟表位N末端的噬菌体蛋白残余序列会妨碍其与OTA抗体的结合。
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研究目的:克隆表达人肠激酶轻链编码基因,以期应用于融合蛋白的切割与纯化。
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Secretory Expression, Purification and Characterization of Bovine Enterokinase Light Chain
牛肠激酶轻链在毕赤酵母中的分泌表达、纯化和活性鉴定
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牛肠激酶催化亚基cDNA的克隆、表达及表达产物的纯化和应用
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经SDS-PAGE测定,纯化的重组肠激酶纯度达80%以上,并能高效切开融合蛋白。
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Enterokinase(EK)是哺乳动物消化系统中最基础的丝氨酸蛋白水解酶之一,由重链和轻链组成,两条链通过一对二硫键相连。
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肠激酶(Enterokinase,EK)是目前生物制药领域纯化重组蛋白产品时用于切割融合蛋白的首选工具酶之一。
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目的:制备能在原核表达系统中表达并特异性识别(Asp)4-Lys序列的鼠源性肠激酶,为推广应用重组肠激酶提供技术平台。
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结论:鼠源性肠激酶轻链在原核细胞中多以包涵体形式表达,天然构象重组肠激酶的获得还需对表达系统进行优化。
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Clone and Expression of Bovine Recombinant Enterokinase Catalytic Subunit in Escherichia Coli
牛肠激酶轻链基因的克隆及其在大肠杆菌中的融合表达的研究
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